正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。
他们合力与恶势力展开斗争……
刘屹宸,张洋,许诗晨,孙振鹏,张德晖,高登
吴樾,柳岩,张茗灿,于海,张春仲,一龙,李若希,唐鑫
埃德温·安德烈,詹姆斯·布鲁尔,Dainis Grube,Gints Andzans,Maya Arwen,艾斯特·蒂奇,Christopher Dane
科林·伊格斯菲德,Stephanie Chao,Roger Yuan,帕特里克·波查
裴子添
赵文卓,王圣迪,徐冬冬,李岷城,范逸臣,桑平,大卫·贝利,葛天,一龙,法尚书
胡兵,袁福福,李牧芸
威廉·鲍德温,迈克尔·帕尔,凯特·霍吉,哈文·巴拉卡,Jessy Holtermann,布莱恩·莱蒙斯,Ryan Jones
斯图尔特·惠特曼,狄龙,彼得·库欣,李丽丽,安东·迪夫伦,刘家荣,黄培基
马特·达蒙,本·阿弗莱克,史蒂文·元,缇雅娜·泰勒,萨莎·卡莱,卡塔琳娜·桑地诺·莫雷诺,斯科特·阿金斯,凯尔·钱德勒,内斯特·卡博内尔,琳娜·埃斯科,辻大介,何塞·巴勃罗·坎蒂略,伊万·阿马罗·布隆,艾莉·莫雷诺,肖恩·迈克尔,克里斯·西尔维斯特里,凯瑟琳·德明,戴夫·费里尔,奇里尔·保兰
查尔顿·赫斯顿,索菲娅·罗兰,雷夫·瓦朗,吉内瓦维·佩吉,约翰·弗拉瑟,加里·雷蒙德,赫德·哈特菲尔德,马西姆·塞拉托,弗兰克·思林,迈克尔·霍尔德恩,安德鲁·克鲁克香克,道格拉斯·威尔默,托里奥·卡米纳提,拉尔夫·杜鲁门,Christopher Rhodes,卡洛·朱斯蒂尼,福斯托·托齐,芭芭拉·埃弗里斯特,尼里奥·贝尔纳迪,赫伯特·罗姆,欧米洛·康帕纳,Antonio Mayans,保罗·穆勒
大卫·达斯马齐连,麦斯·米科尔森,西格妮·韦弗,瑞贝卡·亨德森,希拉·阿蒂姆,索菲·斯隆,Wael Alroyly,Sute Zhao
谭道良,嘉凌,马骥,陈慧楼,李影,铁孟秋,史亭根,龙飞,王若平,游英明
江青霞,袁小田,马金谷,王冠雄,王太郎,韩苏,龙飞,刘皓怡,计鸣,苏元峰,王曼钏,初本科,欧立保,茅敬顺
陈星,刘忠良,茅瑛,梁家仁,闻江龙,金龙,史亭根,史仲田,荆国忠
谭道良,胡锦,韩英杰
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